MIDI FlexTube KIT, 1 kDa MWCO

Opis towaru

MIDI FlexTube KIT, 1 kDa MWCO

• MWCO: 1 kDa
• Objętość FlexTube: 800 µl
• Objętość dializy: 50-800 µl
• Minimalna wielkość próbki do ekstrakcji: 0,5 µg
• Maksymalny fragment żelu: 1 cm x 0,5 cm
• Wydajność odzyskiwania cząsteczek:

90% z żelu agarozowego lub poliakrylamidowego; 70% z żelu SDS-PAGE

• Membrana: Ultra czysta, wolna od siarki i metali ciężkich, traktowana EDTA

IBI MIDI FlexTube są zwykle używane do następujących zastosowań:

• dializa
• ekstrakcja z żelu
• elektroelucja
• odsalanie

Konstrukcja FlexTube pozwala na łatwe ładowanie i rozładowywanie za pomocą standardowej końcówki pipety i zakrętki. W jednym zbiorniku buforowym można umieścić wiele probówek, co zapewnia wysoką przepustowość przy minimalnym czasie obsługi.

Membrana FlexTube jest wykonana z regenerowanej celulozy i ma grubość od 18 do 42 µm. Wymiary membrany dla MIDI FlexTube to 0,9 x 1 cm.

W przypadku MIDI FlexTube minimalna wielkość próbki wynosi 0,5 µg, maksymalny wycinek żelu to 1 cm x 0,5 cm, a objętość dializy wynosi 50-800 µl. MIDI FlexTube jest oferowany z następującymi wartościami odcięcia masy cząsteczkowej (MWCO): 1KDa, 3,5KDa lub 6-8KDa.

W przypadku użycia do dializy lub wymiany buforu, probówki MIDI FlexTube mogą być używane z DNA, RNA, białkami i oligonukleotydami (>15nt) dla małych objętości 50-800µl. Wystarczy umieścić próbkę w probówce za pomocą standardowej pipety, następnie przenieść probówkę do pływaka FlexTube i umieścić w zlewce z buforem.

W przypadku użycia do ekstrakcji żelowej, probówki FlexTube mogą być używane z białkami, RNA, DNA lub oligonukleotydami (>20 nt) i ekstrahowane z poliakrylamidu, agarozy lub dowolnej innej matrycy żelowej w buforze roboczym. Probówki są idealne do kompleksów białko-kwas nukleinowy i dużych fragmentów DNA (>100 kb) z żeli agarozowych lub poliakrylamidowych.

Odzyskiwanie DNA z żeli poliakrylamidowych lub agarozowych jest zazwyczaj większe niż 90%. Więcej informacji można znaleźć w protokole.

Izolacja białek z żelu za pomocą FlexTube zapewnia do 70% wydajności odzysku. Po ekstrakcji z żelu próbka może pozostać w probówce do usunięcia SDS*. Połączenie SDS-PAGE, elektroelucji z FlexTube i buforem do usuwania SDS może zapewnić dokładniejsze określenie masy cząsteczkowej białka dzięki wysokiej wydajności odzysku i czystości próbki. Wpływa również na większą czułość podczas analizy MALDI-MS **.

Midi FlexTube może być również użyty do Oligo PAGE Elektroelucji i Odsalania. Ta metoda jest ogromnym ulepszeniem w stosunku do metody dyfuzji, która jest długotrwałym, całonocnym procesem, który zazwyczaj daje niskie uzyski. FlexTube pozwala na ekstrakcję białka z żelu, a następnie odsalanie próbki przez dializę w tej samej probówce FlexTube.

Probówki IBI MIDI FlexTube są testowane przy użyciu ich do ekstrakcji białek, fragmentów RNA lub DNA o różnej wielkości z żeli agarozowych lub poliakrylamidowych. Zestawy IBI MIDI FlexTube są również testowane pod kątem prostej dializy soli lub wymiany buforów. Jakość wyizolowanego białka, fragmentów RNA lub DNA lub próbki po dializie jest sprawdzana za pomocą kilku testów powszechnie stosowanych w przypadku białek, kwasów nukleinowych i dializy.

FlexTube jest produktem jednorazowego użytku.

*Aby użyć probówek FlexTube do ekstrakcji białek z żelu, należy użyć SeeBand Protein Stain (Extraction grade) lub Quick Blue Stain. Coomassie blue utrwala białka w żelu, podczas gdy SeeBand Protein Stain lub Quick Blue Stain nie. Dlatego SeeBand Protein Stain lub Quick Blue Stain są niezbędne do ekstrakcji żelu białkowego. SeeBand Protein Stain oraz Quick Blue Stain to przyjazne dla środowiska barwniki o wysokiej czułości, które nie zawierają metanolu ani kwasu octowego. SeeBand Protein Stain oraz Quick Blue Stain nie wymagają użycia niebezpiecznych rozpuszczalników do odbarwiania.

** Do wytrącenia białka do analizy metodą MALDI-MS musi zostać użyty bufor MS. Numery katalogowe buforu to IB48500 (3 ml) i IB48501 (5 ml).

Tabela czasów potrzebnych do ekstrakcji białka:

Czas elucji zależy od wielkości cząsteczki białka, przyłożonego napięcia, wielkości wycinka żelu, stosunku poliakrylamid:bisakrylamid i % żelu poliakryloamidowego. Czas elektroelucji na etapie elucji należy dostosować dla każdej próbki indywidualnie.

Tabela 1: Minimalny czas potrzebny do ekstrakcji białek o różnej wielkości z 10% żelu SDS-poliakrylamidowego (29:1 poliakrylamid:bisakrylamid) przy 100V.

Tabela czasów potrzebnych do ekstrakcji DNA/RNA:

Czas elucji zależy od wielkości fragmentu kwasu nukleinowego, stężenia żelu, wielkości wycinka żelu, stosunku poliakrylamid:bisakrylamid i przyłożonego napięcia. Czas elektroelucji na etapie elucji należy dostosować dla każdej próbki indywidualnie.

Tabela 2: Minimalny czas potrzebny do ekstrakcji różnych fragmentów DNA lub RNA z natywnego lub zdenaturowanego 4% żelu poliakrylamidowego (29:1 poliakrylamid:bisakrylamid) przy 100-150V.

Tabela 3: Minimalny czas potrzebny do ekstrakcji fragmentów DNA z 1% żelu agarozowego przy 80-110V.

Najczęściej zadawane pytania:

Dlaczego FlexTube zawierają wodę w sobie i w torebce, w której zostały dostarczone?
Niektóre probówki FlexTube są dostarczane z wodą wewnątrz probówki, aby chronić membranę. Trochę wody może przeciekać przez membranę i woda jest również dodawana do torby.

Czy mogę przyczepić kolejną probówkę do tacki do elektroelucji, aby uruchomić więcej probówek FlexTube jednocześnie? Tak, o ile strzałka na probówce jest skierowana do góry, a membrany skierowane są w stronę pola elektrycznego.

Czy mogę zatężyć próbkę w Flextube przez odwirowanie?
Nie, jeśli Flextube zostanie odwirowany, płyn wycieknie z membrany.

Czy po elektroelucji mogę użyć tej samej probówki do dializy mojej próbki?
Tak, należy wyjąć żel z probówki, a następnie przeprowadzić dializę w dużej ilości wody. Jednak w próbce po elektroelucji mogą nadal znajdować się pozostałości żelu. Więcej informacji można znaleźć w protokole Oligo Page purification.