I-BLUE MIDI PLASMID KIT (ENDOTOXIN-FREE)

Opis towaru

I-BLUE MIDI PLASMID KIT (ENDOTOXIN-FREE)

• Wielkość próbki: 50 - 150 ml wyhodowanych komórek bakteryjnych
• Format: kolumna z żywicą anionowymienną, przepływ grawitacyjny
• Oczekiwana wydajność: do 400 µg czystego plazmidowego DNA o czystości do transfekcji ze 100 ml hodowanych komórek bakteryjnych
• Objętość elucji: 500 µl - 2 ml
• Czas pracy: ≤80 minut

Zestaw I-Blue Midi Plasmid Endo-Free Kit (Endotoxin Free) wykorzystuje przygotowane kolumny z żywicą anionowymienną

do oczyszczania plazmidowego DNA z 50-150 ml hodowanych komórek bakteryjnych. Bufor I-Blue Lysis (opcjonalny wskaźnik koloru)

jest dołączony do zestawu, aby zapobiec typowym błędom w obsłudze, zapewniając skuteczną lizę komórek i wytrącanie SDS.

Bufor do lizy I-Blue jest dodawany do etapu ponownego zawieszenia, a następnie dodaje się bufor PM2.

Po dodaniu buforu PM2 próbka podczas mieszania zacznie zmieniać kolor na niebieski. Próbka będzie całkowicie niebieska, po osiągnięciu całkowitej lizy.

Bezbarwne obszary lub brązowe grudki wskazują na niepełną lizę i mieszanie należy kontynuować, aż próbka stanie się całkowicie niebieska.

Podczas etapu neutralizacji dodawany jest bufor PM3, a energiczne potrząsanie probówką spowoduje przywrócenie neutralnego koloru próbki.

Gdy próbka jest całkowicie bezbarwna, neutralizacja jest zakończona. Można teraz dodać bufor PER w celu usunięcia endotoksyn.

Teraz można przeprowadzić wiązanie, przemywanie i elucję oczyszczonego plazmidowego DNA.

Ze względu na wysoką wydajność kolumny Midi całą procedurę można zakończyć w 80 minut bez użycia ultrawirówek, HPLC lub toksycznych odczynników.

Oczyszczony plazmidowy DNA nadaje się do transfekcji, reakcji sekwencjonowania, ligacji, PCR, transkrypcji in vitro, mikroiniekcji, trawienia enzymami restrykcyjnymi i pistoletu genowego.

Kontrola jakości

Jakość zestawu I-Blue Midi Plasmid Endo-Free jest testowana na zasadzie „lot-to-lot”, poprzez izolację plazmidowego DNA z 50 ml hodowli E. coli (DH5α), zawierającej pBluescript (A600> 2U / ml).

Po procesie oczyszczania uzyskuje się wydajność powyżej 250 µg, a stosunek A260 / A280 wynosi 1,8-2,0. Oczyszczony plazmid (1 µg) stosuje się do trawienia EcoRI i analizuje przez elektroforezę.