I-BLUE MIDI PLASMID KIT

Opis towaru

I-BLUE MIDI PLASMID KIT

• Wielkość próbki: 50 - 150 ml wyhodowanych komórek bakteryjnych
• Format: kolumna z żywicą anionowymienną, przepływ grawitacyjny
• Oczekiwana wydajność: do 400 µg czystego plazmidowego DNA o czystości do transfekcji ze 100 ml hodowanych komórek bakteryjnych
• Objętość elucji: 500 µl - 2 ml
• Czas pracy: ≤80 minut

Zestaw I-Blue Midi Plasmid Kit wykorzystuje przygotowane kolumny z żywicą anionowymienną do oczyszczania plazmidowego DNA z 50 - 150 ml hodowanych komórek bakteryjnych.

Bufor I-Blue Lysis (opcjonalny wskaźnik koloru) jest dołączony do zestawu, aby zapobiec typowym błędom w obsłudze, zapewniając skuteczną lizę i neutralizację komórek.

Zmodyfikowaną metodę lizy alkalicznej i traktowanie RNazą stosuje się w celu uzyskania czystego lizatu komórkowego z minimalnymi zanieczyszczeniami genomowego DNA / RNA.

Bufor do lizy I-Blue dodaje się podczas etapu ponownego zawieszania komórek, a następnie dodaje się bufor PM2.

Po dodaniu buforu PM2 próbka zacznie zmieniać kolor na niebieski podczas mieszania. Próbka będzie całkowicie niebieska, po osiągnięciu całkowitej lizy.

Bezbarwne obszary lub brązowe grudki wskazują na niepełną lizę i mieszanie należy kontynuować, aż próbka stanie się całkowicie niebieska.

Podczas etapu neutralizacji dodawany jest bufor PM3 i energiczne potrząsanie probówką spowoduje przywrócenie próbki z powrotem do neutralnego koloru.

Kiedy próbka jest całkowicie bezbarwna, neutralizacja jest zakończona.

Ze względu na wysoką wydajność kolumny Midi całą procedurę można zakończyć w 80 minut bez użycia ultrawirówek, HPLC lub toksycznych odczynników.

Oczyszczony plazmidowy DNA nadaje się do transfekcji, reakcji sekwencjonowania, ligacji, PCR, transkrypcji in vitro, mikroiniekcji, trawienia enzymami restrykcyjnymi i pistoletu genowego.

Kontrola jakości

Jakość zestawu I-Blue Midi Plasmid Kit jest testowana na zasadzie „lot-to-lot” poprzez izolację DNA plazmidu z 50 ml hodowli E. coli (DH5α), zawierającej pBluescript (A600> 2U / ml). Po procesie oczyszczania uzyskuje się wydajność powyżej 250 µg, a stosunek A260 / A280 wynosi 1,8-2,0. Oczyszczony plazmid (1 µg) stosuje się do trawienia EcoRI i analizuje przez elektroforezę.

Najczęściej zadawane pytania:

Jaki jest skład buforu PW w zestawie plazmidu I-Blue Midi?

Dokładny skład buforu IBI PW jest zastrzeżony, ale jest to formuła QIAGEN.

Zawiera: 1,0 M NaCl, 50 mM MOPS, pH 7,0, 15% izopropanol.