HI-SPEED MINI PLASMID KIT

Opis towaru

HI-SPEED MINI PLASMID KIT

• Wielkość próbki: 1-5 ml kultury bakteryjnej
• Oczekiwana wydajność: 20-30 µg dla plazmidów o dużej liczbie kopii / 3-10 µg dla plazmidów o małej liczbie kopii
• Format: Kolumienki
• Czas pracy: ≤30 minut
• Objętość elucji 30-100 µl

Zestaw Hi Speed Mini Plasmid Kit jest przeznaczony do szybkiej izolacji DNA plazmidowego lub kosmidowego z 1-5 ml kultur bakteryjnych.

Zmodyfikowana metoda lizy alkalicznej i traktowanie RNazą są wykorzystywane do tworzenia oczyszczonego lizatu komórkowego z minimalną ilością zanieczyszczeń genomowym DNA i RNA.

W obecności soli chaotropowej plazmidowy DNA w lizacie wiąże się z matrycą z włókna szklanego w kolumnie. Zanieczyszczenia wymywa się buforem do przemywania na bazie etanolu.

Oczyszczony plazmidowy DNA wymywa się za pomocą buforu elucyjnego lub wody o niskiej zawartości soli. Ta procedura nie wymaga ekstrakcji DNA fenolem.

Typowe wydajności wynoszą 20-30 µg dla plazmidów o dużej liczbie kopii lub 3-10 µg dla plazmidów o małej liczbie kopii.

Oczyszczony plazmidowy DNA jest gotowy do użycia w reakcjach trawienia enzymami restrykcyjnymi, ligacji, PCR lub sekwencjonowania. Całą procedurę można wykonać w mniej niż 30 minut.

Kontrola jakości

Jakość zestawu Hi Speed Plasmid Mini Kit jest testowana na zasadzie „lot-to-lot” poprzez izolację plazmidowego DNA z 4 ml hodowli E. coli (DH5α), zawierającej plazmid pBluescript (A600> 2U/ml).

Po procesie oczyszczania spodziewana jest wydajność powyżej 20 µg, a stosunek A260 / A280 wynosi 1,7-1,9. Oczyszczony plazmid (1 µg) zastosowano do trawienia EcoRI i sprawdzono przez elektroforezę.

Najczęściej zadawane pytania:

Jaki zestaw konkurencji jest porównywalny?

Zestaw QIAGEN QIAprep Spin Miniprep oraz zestaw QIAGEN QuickLyse Miniprep Kit.

Czy odczynniki QIAGEN'S mogą być używane z kolumnami IBI?

Tak, wszystko, co jest „oparte na lizie”, będzie działać.

Czy stosowanie ampicyliny lub innych antybiotyków podczas hodowli E. coli jest konieczne, aby uzyskać odpowiednią wydajność z zestawem HI-SPEED MINI PLASMID KIT?

Tak, aby uzyskać dobrą wydajność, bakterie E. coli należy potraktować antybiotykiem.

Jak zwiększyć wydajność tego zestawu?

1. Wydłuż czas lizy

2. Podgrzej wstępnie bufor do elucji

3. Wykonaj etap elucji dwukrotnie

4. W przypadku dużej /stężonej próbki należy dodać większe ilośći buforów PD 1, 2, 3

Jaka jest maksymalna ilość próbki dla kolumny / probówki Mini Plasmid?

Maksymalna ilość próbki dla kolumny / probówki to 4 ml.

Jaki jest podstawowy skład buforu do elucji?

Podstawowym składem buforu jest Tris-HCl pH 8,5. Ten bufor nie zawiera EDTA. Możesz również użyć buforu Pure Water lub TE.

Czy zestaw do ekstrakcji plazmidowego DNA można zastosować na bakteriach Gram (+)?

Nasze zestawy plazmidów są przeznaczone przede wszystkim do ekstrakcji plazmidowego DNA z bakterii Gram (-), takich jak E. Coli. Bakterie Gram (+) mają grubsze ściany komórkowe, więc bufory do lizy komórek zawarte w zestawie nie powodują ich łatwej lizy. Jednak ekstrakcję plazmidowego DNA z bakterii Gram (+) można nadal przeprowadzić po dodatkowej obróbce. Po ponownym zawieszeniu osadzonych komórek bakteryjnych w buforze PD1, dodać lizozym, aby uzyskać końcowe stężenie 3–5 mg/ml. Inkubować zawiesinę w 37°C przez 30–60 minut (lub krócej, jeśli stosuje się lizozym o stężeniu 5 mg/ml). Zabieg ten osłabia ścianę komórkową bakterii Gram (+). Dodaj PD2 i postępuj zgodnie z resztą protokołu. W przypadku niektórych bakterii Gram (+) o cienkich ścianach komórkowych, takich jak Lactobacillus, do lizy komórek może wystarczyć podwójna ilość buforu PD1, PD2 i PD3. Mimo to nadal zalecamy traktowanie bakterii Gram (+) lizozymem w celu ułatwienia lizy komórek.

Jaka jest różnica i / lub przeznaczenie buforu W1 w porównaniu z buforem płuczącym?

W1 zawiera sól chaotropową i etanol. Sól chaotropowa może hamować i usuwać aktywność enzymów, takich jak polimeraza Taq i endonukleaza.

Wash Buffer zawiera niskie stężenia soli i usunie sole i białka z końcowej próbki.

Jaka jest różnica między zestawem Hi-Speed Mini Plasmid Kit a zestawami I-Blue Mini Plasmid Kit?

Różnice dotyczą 2-krotnej objętości RNAzy A i buforu lizy I-Blue w I-Blue Mini. Większa objętość RNAzy A zwiększa wydajność w przypadku większych objętości próbek.

Hi Speed Mini pozwala na 1-5 ml, a I-Blue Mini na 1-7 ml, co da więcej plazmidowego DNA. Wszystkie inne bufory są takie same.