miRNA ISOLATION KIT

Opis towaru

miRNA ISOLATION KIT

• Wielkość próbki: 100 mg tkanki zwierzęcej/ 1 × 10⁶ hodowanych komórek
• Wydajność: 5-30 µg
• Format: kolumienki spinowe
• Czas pracy: ≤30 minut
• Objętość elucji: 50 µl

Zestawy miRNA Isolation Kits są przeznaczone do oczyszczania miRNA i innych małych komórkowych RNA z próbek tkanek i hodowanych komórek. Oczyszczanie miRNA umożliwia badanie ważnych biologicznych szlaków regulacji genów. Standardowy protokół izolacji całkowitego RNA i miRNA nie jest zoptymalizowany pod kątem małych cząsteczek RNA, a zatem powoduje utratę znacznych ilości miRNA i innych małych RNA. Ponadto usunięcie przeważnie większych RNA jest wymagane do dokładnej analizy ekspresji miRNA za pomocą qPCR lub analizy mikromacierzy. Te zestawy są specjalnie zaprojektowane do oczyszczania małych RNA przy minimalnym zanieczyszczeniu dużymi cząsteczkami RNA lub genomowym DNA. Metoda wykorzystuje kolumnę spinową z matrycą filtrującą na bazie krzemionki, która wiąże RNA w obecności soli chaotropowej. Metoda ta opiera się na selektywnym wiązaniu cząsteczek RNA o różnej wielkości z matrycą włókien na bazie krzemionki, gdy w rozpuszczalniku obecne są różne stężenia etanolu.

Najczęściej zadawane pytania

Jaka jest zdolność wiązania kolumny do izolacji miRNA? Zdolność wiązania wynosi około 30 µg.

Jakie są porównywalne zestawy konkurencji? QIAGEN miRNeasy Mini Kit

Czy kolumny wykorzystywane do pracy z RNA mogą być używane do aplikacji miRNA?

Nie, istnieją różnice między kolumnami całkowitego RNA i miRNA.

Czy zestaw miRNA można wykorzystać do izolacji miRNA z moczu?

Tak, należy postępować zgodnie z tymi wstępnymi krokami:

1. Przenieść 10 ml moczu do probówki wirówkowej o pojemności 15 ml (wolnej od RNAzy) i wirować przy 6000 x g przez 2 minuty.

2. Odrzucić supernatant; dodać 500 µl wody wolnej od RNAzy do osadu i worteksować przez 5 sekund.

3. Przenieść próbkę do 1,5 ml probówki  (wolnej od RNAzy).

4. Wirować przy 6000 x g przez 2 minuty, a następnie odrzucić supernatant. Postępuj zgodnie z krokiem 1. Lysis protokołu miRNA Isolation kit. Dodać 200 µl Lysis Buffer do 1,5 ml probówki zawierającej osad komórek.

Jaki jest skład buforu do lizy?

Bufor lizujący do zestawu do izolacji miRNA składa się z izotiocyjanianu guanidyny i detergentu – SLS (Sarkozynian lauroilu sodu).

Czy bufor do lizy jedynie rozbija błonę komórkową, aby uzyskać dostęp do miRNA, czy też dokonuje lizy całego jądra komórkowego?

Bufor do lizy w spowoduje lizę całego jądra komórkowego.

Jaka jest wielkość oczyszczonego RNA z tego zestawu miRNA?

Większość RNA oczyszczonego przy użyciu zestawu miRNA ma mniej niż 100 nt. Nieco większe RNA można również oczyścić przy użyciu zmodyfikowanego protokołu.