GEL/PCR DNA FRAGMENT EXTRACTION KIT

Opis towaru

GEL/PCR DNA FRAGMENT EXTRACTION KIT

• Wielkość próbki: do 300 mg żelu agarozowego / do 100 µl produktów PCR
• Rozmiar fragmentu: 70bp - 20kb
• Zdolność wiązania: 10 µg DNA

• Oczekiwana wydajność: 80-90% dla ekstrakcji żelu / 90-95% dla oczyszczania PCR
• Format: kolumienkowy
• Objętość elucji: 10 - 50ul
• Czas pracy: ≤20 minut

Zestawy IBI PCR Clean up są przeznaczone do odzyskiwania fragmentów DNA (70 bp - 20 kb) z żelu agarozowego, PCR lub innej reakcji enzymatycznej. Ta metoda wykorzystuje sól chaotropową do rozpuszczenia żelu agarozowego i denaturacji enzymów.

Fragmenty DNA w soli chaotropowej są związane z matrycą z włókna szklanego kolumny. Zanieczyszczenia przemywa się buforem do przemywania (zawierającym etanol), a oczyszczone fragmenty DNA eluuje się buforem do elucji o niskiej zawartości soli lub czystą wodą.

Sole, enzymy lub niezwiązane nukleotydy można skutecznie usunąć z mieszaniny reakcyjnej bez ekstrakcji fenolem lub wytrącania alkoholem. W przypadku oczyszczania metodą PCR odzysk wynosi zazwyczaj 90 - 95%.

Całą procedurę można zakończyć w ciągu 20 minut, a eluowany DNA jest gotowy do użycia w trawieniu restrykcyjnym, ligacji, PCR, sekwencjonowaniu fluorescencyjnym lub radioaktywnym i znakowaniu DNA.

Najczęściej zadawane pytania

Czy zestaw do PCR / Gel Extract może być używany z warstwą wodną powstałą podczas ekstrakcji fenolem / chloroformem?

Tak, zestaw IBI PCR / Gel Extract będzie działał z warstwą wodną powstałą podczas ekstrakcji fenolem / chloroformem

Jakie są porównywalne zestawy konkurencji?

QIAquick Gel Extraction Kit lub QIAquick PCR Purification Kit

Do uruchomienia żeli zastosowano bufor TBE. Dlaczego uzyskuję niski poziom DNA z ekstrakcji żelu?

Upewnij się, że bufor TBE jest świeży. Nie uruchamiaj wielu żeli przy użyciu tego samego buforu. Zmienia to pH buforu i wpływa na wydajność ekstrakcji żelu.

Czy mogę użyć wody do etapu elucji, jeśli zabraknie mi buforu do elucji?

W większości zastosowań; 10 Megaomów, typ 1 D.I. Water, będzie działać na etapie elucji, jeśli bufor nie jest dostępny. Jednak to nie zadziała dla wszystkich aplikacji, więc nie możemy tego zagwarantować.

W zestawach konkurencji stwierdzono, że etap izopropanolu podczas lizy może pomóc zwiększyć wydajność dla próbek, które zaczynają się od bardzo małej ilości DNA. Czy to działa z tym w przypadku tego zestawu?

Tak, ten krok można zastosować w zestawie IBI. Użyj 1 µl izopropanolu na każdy mg wycinka żelu. Jest to skuteczne TYLKO, jeśli cząsteczka DNA ma od 500 bp do 4 kb. Wszystko poza tym zakresem i nie zwiększa wydajności.

Jaki jest skład buforu do elucji?

Bufor do elucji składa się z 10 mM Tris-HCl, pH 8,0 w 25 ° C.

Jeśli mam SDS w mojej próbce, czy wpłynie to niekorzystnie na ekstrakcję żelu?

Mała ilość SDS w próbce NIE wpłynie negatywnie na odzyskanie żelu.

Czy mogę wyodrębnić jednoniciowy DNA z wycinka żelu?

Tak, ten zestaw umożliwia ekstrakcję jednoniciowego DNA z wycinka żelu.

Czy istnieje minimalna ilość DNA wymagana do użycia?

Uzysk jest wprost proporcjonalny do wkładu. Im mniej użyjesz, tym mniej otrzymasz na końcu. Najlepiej zacząć od co najmniej 0,5 µg DNA do czyszczenia metodą PCR i ekstrakcji żelu.

Jaki jest cel buforu W1 w porównaniu z buforem płuczącym?

W1 zawiera sól chaotropową i etanol. Sól chaotropowa może hamować i usuwać aktywność enzymów, takich jak polimeraza Taq i endonukleaza.

Wash Buffer zawiera niższe stężenia soli i usunie sole i białka z końcowej próbki.

Porównanie Gel/PCR Extraction Kits- IBI and Brand Q