DNA/RNA/PROTEIN EXTRACTION KIT

Opis towaru

DNA/RNA/PROTEIN EXTRACTION KIT

• Wielkość próbki: do 5 × 10⁶ hodowanych komórek zwierzęcych / do 25 mg tkanki zwierzęcej / do 500 µl krwi pełnej / do 200 µl płynów biologicznych (surowica, osocze)
• Oczekiwana wydajność: do 9 µg genomowego DNA / 20 µg całkowitego RNA / 120 µg białka z 1 × 10⁶ komórek HeLa
• Czas pracy: oczyszczanie DNA / RNA w ciągu 25 minut, wytrącanie białka w ciągu 50 minut
• Objętość elucji: 50 - 200 µl (genomowe DNA) / 25 - 50 µl (całkowite RNA)
• Format: kolumna spinowa genomowego DNA i kolumna spinowa całkowitego RNA

Zestaw IBI All Prep DNA RNA Protein Mini Kit zapewnia skuteczną metodę jednoczesnego oczyszczania genomowego DNA, całkowitego RNA i całkowitego białka z hodowanych komórek, tkanek zwierzęcych, pełnej krwi i płynów biologicznych. Sól chaotropowa służy do lizy komórek i inaktywacji DNaz i RNaz, umożliwiając DNA związanie się z kolumną spinową genomowego DNA. Wyciek można następnie przenieść na kolumnę  w celu związania RNA. Zanieczyszczenia są skutecznie usuwane przy użyciu buforów do przemywania, po czym następuje elucja czystego genomowego DNA w buforze o niskiej zawartości soli i elucja czystego całkowitego RNA w wodzie wolnej od RNaz. Oczyszczanie DNA / RNA można zakończyć w 25 minut bez ekstrakcji fenolem / chloroformem lub wytrącania alkoholem, a oczyszczanie białka można zakończyć w 50 minut. Oczyszczone DNA o wielkości około 20-30 kb nadaje się do użycia w PCR lub innych reakcjach enzymatycznych, a oczyszczone RNA (w tym miRNA) jest gotowe do użycia w RT-PCR, Real-Time PCR, Northern blotting, wydłużaniu starterów, selekcji mRNA i syntezę cDNA. Oczyszczone białka można bezpośrednio analizować na SDS-PAGE, a następnie western blot.

Kontrola jakości:

Jakość zestawu All Prep DNA RNA Protein Mini jest testowana na zasadzie „lot-to-lot” poprzez izolację genomowego DNA i całkowitego RNA z hodowanych 1x10⁶ komórek zwierzęcych. Oczyszczony DNA i całkowity RNA ocenia się ilościowo za pomocą spektrofotometru i analizuje przez elektroforezę na 1% żelu agarozowym. Oczyszczone białko określa się ilościowo w teście Bradforda analizowanym na SDS-PAGE.

Najczęściej zadawane pytania:

Czy białko jest zdenaturowane?

Tak, DR Buffer użyty na etapie lizy zawiera silne składniki denaturujące. W ten sposób białka ulegną denaturacji podczas etapu lizy. Jednym z celów buforu DR jest inaktywacja całej RNAzy i proteaz.

Jakie rozmiary fragmentów DNA i RNA można wyekstrahować? Średnia wielkość genomowego DNA wynosi od 20 do 30 kb. Wszystkie fragmenty RNA większe niż 200 NT można oczyścić. Jednak niektóre małe RNA i tRNA (> 100 NT) można również pobrać z kolumny.

Czy mogę używać zamrożonych komórek z tym zestawem?

Tak, po wyjęciu próbki komórek z zamrażarki, natychmiast dodaj bufor DR (zmieszany z B-ME) do osadu komórek i ponownie zawieś go przez pipetowanie.

Czy mogę użyć wyekstrahowanego białka na natywnym żelu?

Nie, ponieważ białko zostało zdenaturowane na etapie lizy.

Czy DNA mitochondriów jest obecne w wyekstrahowanym DNA całkowitym? Teoretycznie jednak mitochondrialne DNA powinno być obecne w wyekstrahowanym DNA całkowitym; NIE testowaliśmy tego dla pewności.

Mam problemy z ponownym zawieszeniem osadu białka, jakieś sugestie?

Zmień pH buforu zawiesinowego. Użyj innego buforu do zawiesiny i innego detergentu. Spróbuj użyć 5% SDS do rozpuszczenia peletki.

Czy mogę użyć buforu do lizy / RIPPA do rozpuszczenia osadu białka? Możesz użyć buforu RIPPA do rozpuszczenia osadu białka. Jeśli jednak osad jest trudny do rozpuszczenia, bufor DV lub 5% roztwór SDS może działać lepiej. Gdy osad zostanie rozpuszczony, wymieszaj białko z 2 X buforem Laemelli i załaduj na żel.

Czy ten zestaw może być używany do próbek do protokołu ChiP? Prawdopodobnie nie, ponieważ większość próbek do tego protokołu została poddana obróbce formaldehydem.

Czy zestaw może być używany do próbek zatopionych w parafinie? Potraktuj próbkę ksylenem i przemyj etanolem, a następnie przystąp do używania zestawu.

Czy ten zestaw usunie białka błonowe? Ponieważ bufor DR zawiera Triton X-100, powinno być możliwe wytrącenie białka za pomocą acetonu.

Czy zestaw DNA-RNA-Protein będzie działał na próbkach tkanki mózgowej? Ten zestaw jest zoptymalizowany do użytku z próbkami łatwymi do lizy. Tkanka mózgowa ma wysoką zawartość tłuszczu i nie będzie dobrze działać w tym zestawie. Zamiast tego polecamy zestaw Tri-Isolate.

Dlaczego mam niski stosunek A260 / 230? Niskie 260/230 najprawdopodobniej wynikało z zanieczyszczenia produktu DNA solą. Przemyć dwukrotnie kolumnę GD, aby usunąć sól z membrany przed elucją DNA.